IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦立廷

作者： 秦立廷;祁小乐;高宏雷;高玉龙;王笑梅

作者机构：

关键词： 传染性法氏囊病病毒;VP5;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 04 期

页码： 292-296

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb)。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDVVP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23ku。Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和westernblot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清Ⅱ型IBDV23/82株VP5反应,不与血清Ⅰ型IBDVGt株VP5反应。腹水抗体间接ELISA效价为1×104。该mAb的制备为研究血清Ⅱ型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础。

分类号： S852.659

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