烟草NteIF2α的原核表达、纯化及多克隆抗体制备和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈德鑫

作者： 陈德鑫;李雯雯;李思斌;李宁;郭豪;龙月;杨永霞;贾红昉;张洪映

作者机构：

关键词： 烟草;真核翻译起始因子2α(eIF2α);原核表达;蛋白纯化;多克隆抗体

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2017 年 25 卷 01 期

页码： 50-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,e IF2α)在真核生物的蛋白合成调控中起重要作用。为了研究e IF2α的功能及其参与的烟草(Nicotiana tabacum)蛋白翻译调控机制,本研究首先构建了原核表达载体p ET15b-Nte IF2α,并使用0.2和0.5 mmol/L异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导4 h,在大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌BL21-Codon Plus-(DE3)-RIPL中成功表达了烟草K326的Nte IF2α蛋白,并采用Western blot对表达的蛋白进行了鉴定。其次,对Nte IF2α的原核表达条件进行优化,结果表明,在16℃、0.2 mmol/L IPTG诱导13 h,在大肠杆菌上清中获得了可溶性的Nte IF2α蛋白。采用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析柱和分子筛柱对获得的重组蛋白进行纯化,获得条带单一的纯蛋白。最后,制备了具有较高特异性和灵敏性的Nte IF2α多克隆抗体,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,Nte IF2α抗体的效价为1∶400 000。采用制备的抗体对Nte IF2α在烟草K326不同组织的表达情况进行了检测,结果表明,Nte IF2α在叶片中表达最高,在根、茎和叶片中的表达量较低或者不表达。本研究实现了Nte IF2α蛋白的原核表达和纯化,制备了高效特异的Nte IF2α抗体。研究结果为进一步探索植物e IF2α的功能及其参与的蛋白翻译调控机理提供了基础资料。

分类号： Q943.2

  • 相关文献

[1]烟草NteIF2α的原核表达、纯化及多克隆抗体制备和应用. 陈德鑫,李雯雯,李思斌,李宁,郭豪,龙月,杨永霞,贾红昉,张洪映,崔红,张松涛. 2016

[2]Carboxin抗性基因(Cbx~R)原核表达及多克隆抗体的制备. 李小宇,张正坤,王秋华,张春雨,张淋淋. 2015

[3]小麦热激蛋白WHSP90基因的原核表达及多克隆抗体制备. 李琳,徐兆师,刘丽,于卓,李连城,陈明,马有志. 2009

[4]口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备. 辛旭,吴香菊,齐静,王永志,李相安,杜正国,单虎,杜以军. 2021

[5]创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达. 李素一,吴唯维,李盼,柯翎,许斌福,林晨韬,林天龙,陈叙. 2013

[6]棉蚜P450 CYP6CY3的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备. 魏原杰,王亚美,黄丽娜,刘宁,赵洁,艾新宇,刘小宁. 2017

[7]小麦TaMAPK2激酶基因的原核表达及多克隆抗体制备. 刘沛,徐兆师,晏月明,李连城,陈明,马有志. 2011

[8]鳗鲡疱疹病毒ORF51基因的原核表达及多克隆抗体的制备. 李友娟,郭凤达,葛均青,林天龙. 2014

[9]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-801基因的分子特征分析及其多克隆抗体制备. 贡莎莎,孟庆玲,乔军,钟文强,陈英,才学鹏. 2018

[10]蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备. 张涛,罗维玉,姜水涛,朱鹏阳,李呈军,陈化兰,孙晓林,姜丽. 2016

[11]甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备. 胡文,孟春春,李传峰,陈宗艳,梁瑞英,李宁,黄云秀,吴润,刘光清. 2014

[12]口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定. 陈飞,吴香菊,齐静,成子强,杜以军. 2019

[13]激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备. 徐娜,张芷盈,杜星南,于黛辉,郑海学,陈霞,伍国强. 2025

[14]猪伪狂犬病病毒gE蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备. 李健楠,刘清艳,王娟,邢燕茹,陈荣琳,高硕磊,祝宇翔,杨静怡,祝军,孙英峰,于海. 2025

[15]牛IRF7蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备. 张江伟,张超,何金科,席静,孙天浩,何延华,陈创夫. 2021

[16]小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化. 杨书玲,张龙雨,张改生,桑青,刘红占,朱启迪,张新钵,赵新亮. 2013

[17]棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定. 李波,倪志勇,石庆华,范玲. 2010

[18]鸡补体C3d抗血清的制备与应用. 闫敏鑫,黄秀芬,任慧英,刘杉杉,姜良,李永清. 2015

[19]猪轮状病毒NJ2012株VP8基因序列分析及原核表达. 常新见,周金柱,范宝超,郭容利,朱琳,赵永祥,牛家强,何孔旺,李彬. 2020

[20]水稻组氨酸磷酸转运蛋白OsAHP2的表达及纯化. 孙丽静,李倩影,王培楠,孙颖. 2020

作者其他论文 更多>>

微信小程序