文献类型： 中文期刊
第一作者： 张越秀
作者： 张越秀;张华伟;李连峰;仇华吉
作者机构：
关键词： CRISPR/Cas9;2'-5'寡腺苷酸合成酶2;PK-15;猪瘟病毒
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2019 年 11 期
页码： 1094-1098+1105
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为研究猪源2'-5'寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的PK-15细胞系(PK-OAS2-KO)。在构建PK-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导PK-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染PK15细胞获得的PK-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的PK-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。
分类号： S852.651
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