牛白细胞介素-8单克隆抗体制备及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨蕊1,2

作者： 杨蕊1,2;靳家鑫1,2;张泽1;时文健1;张广智1;丁家波1;鑫婷1

作者机构：

关键词： 牛;白细胞介素-8;单克隆抗体;ELISA;牛结核病

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 52 卷 008 期

页码： 3830-3837

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒,用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测,为牛结核(bovine tuberculosis,b TB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】将牛IL-8基因分别连接至p GEX-6P-1和pc DNA3.1载体,并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达,以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白;采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体;通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法;定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平,评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达,且纯化的蛋白纯度高于90%;经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株,亚型鉴定均为Ig G1型;棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体;以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测,结果显示,结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P<0.01)。【结论】成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心ELISA检测方法,可实现对天然牛IL-8的定量检测,有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。

分类号：

S858.23

  • 相关文献

[1]牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用. 靳家鑫,杨蕊,张泽,时文健,张广智,丁家波,鑫婷. 2025

[2]2020-2021年宁夏地区牛支原体血清流行病学调查与分析. 郭亚男,闫背背,李勇,王建东,梁小军,何生虎. 2023

[3]应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法. 辛九庆,高玉龙,李媛,王砚范,钱爱东. 2006

[4]植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定. 胡骁飞,魏凤仙,李青梅,职爱民,王方雨,孙亚宁,柴书军,付晓鹤. 2012

[5]抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定. 许保疆,陈陆,游一,刘春生,郑鹿平,王川庆. 2009

[6]SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1不同细胞中的表达鉴定. 戈曼,吴星亮,尹鑫,魏萍,王晓钧. 2013

[7]传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立. 王晓丽,王永山,欧阳伟,夏兴霞,潘群兴,毕振威,诸玉梅. 2018

[8]检测猪鼻支原体抗原的ELISA方法的建立及其应用. 朱红振,危艳武,黄立平,刘丹,夏德利,吴洪丽,边海桥,冯力,刘长明. 2019

[9]黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B_1免疫学检测方法的建立. 姚静静,胡骁飞,韩俊岭,徐帆,滕蔓,邢云瑞,孙亚宁,邓瑞广,张改平. 2019

[10]大豆脂肪氧化同工酶(Lox1)单克隆抗体的制备. 刘渊,张孟臣,张彩英,马峙英. 2007

[11]诺维氏梭菌α毒素单克隆抗体的制备与鉴定. 孟德志,邢斌,翁鸿宇,王秀媛,王芳,杨玲玲,柴同杰,韦良孟,戴培强. 2022

[12]抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体识别的抗原表位分析. 肖治军,张改平,杨汉春,杨艳艳,李学伍,邓瑞广,赵东. 2006

[13]兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立. 秦海斌,刘怀然,曲连东,刘家森,韩凌霞,姜骞,李亚明,杨增岐. 2008

[14]单克隆抗体间接竞争ELISA测定水体中氟虫腈. 余向阳,颜春荣,刘贤进. 2004

[15]C型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定. 杨沁,林彤,常惠芸,薛慧文. 2013

[16]单克隆抗体在动物衣原体病血清诊断上的应用. 谢琴,高跃路,何存利,史建斌,祁茹. 2001

[17]氟虫腈单克隆抗体制备及其性能分析. 颜春荣,刘贤进,余向阳,张存政,王冬兰,廖海丰,韩召军. 2003

[18]抗鸭副粘病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定. 程晓霞,朱小丽,陈少莺,王劭,陈仕龙. 2011

[19]SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1在不同细胞中的表达鉴定. 戈曼,吴星亮,尹鑫,魏萍,王晓钧. 2013

[20]兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法. 秦海斌,刘怀然,刘家森,姜骞,韩凌霞,司昌德,曲连东. 2007

作者其他论文 更多>>

微信小程序