禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶的表达及其活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周艳

作者： 周艳;包红朵;张辉;张莉莉;王冉

作者机构：

关键词： 革兰阴性菌;禽致病性大肠杆菌噬菌体;噬菌体裂解酶

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 11 期

页码： 1109-1113

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶基因(Lysin基因),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-LysJS09,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。在37℃IPTG浓度为1.0mmol/L诱导4h表达效果最好。重组融合蛋白LysJS09在BL21(DE3)中获得了高表达,在N端具有His标签,其分子质量约为38.9ku。重组融合蛋白以分泌型方式表达,经His-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后获得的重组蛋白LysJS09的纯度为97%。裂解活性试验表明,该裂解酶单独使用和加入EDTA(0.1mol/L)均无体外酶活性;但菌体内裂解试验表明,表达的裂解酶对宿主菌具有一定的裂解作用。

分类号： S852.61

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