通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶

文献类型： 中文期刊

第一作者： 熊爱生

作者： 熊爱生;姚泉洪;彭日荷;陈建民;李贤;范惠琴

作者机构：

关键词： β-葡萄糖苷酸酶;DNA改组;体外分子进化

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2003 年 19 卷 02 期

页码： 162-167

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 3倍

分类号： Q78

  • 相关文献

[1]通过体外分子进化技术获得耐高温β-葡萄糖苷酸酶的研究. 熊爱生,姚泉洪,彭日荷,陈建民,李贤,范惠琴. 2002

[2]体外定向分子进化的新策略及新应用. 熊爱生,姚泉洪,章镇,彭日荷,庄静,徐芳,刘金戈,朱宏. 2005

[3]基因的推理设计与改造——体外分子进化的捷径. 熊爱生,姚泉洪,章镇,彭日荷,庄静,徐芳,刘金戈,朱宏. 2006

[4]蔬菜中大肠杆菌的快速检测方法. 孙锡娟,汪雅谷,卢善玲,宋荣浩,卢纯惠. 1997

[5]钙-钙调素调节拟南芥热激基因的表达. 刘宏涛,李冰,李国良,周人纲. 2004

[6]白木香愈创木烯合酶基因(AsSGS)启动子的克隆及功能初步鉴定. 何访,梅文莉,李辉亮,郭冬,彭世清,戴好富. 2014

[7]瑞氏木霉碳源阻遏相关基因Cre1的分子改造. 陈东,张穗生,陈英. 2014

[8]酶体外定向分子进化技术:环境生物污染治理中的新星. 熊爱生,章镇,姚泉洪,彭日荷,庄静,徐芳,刘金戈,朱宏. 2006

[9]基因体外定向分子进化技术在农业中应用的研究进展. 熊爱生,姚泉洪,章镇,彭日荷,庄静,徐芳,刘金戈,朱宏. 2005

[10]蛋白质定向进化技术的研究进展. 苏怡丹,伍宁丰,刘国安. 2009

[11]拟南芥K~+转运蛋白AtKup1基因的DNA改组. 郭兆奎,杨谦,姚泉洪,万秀清,颜培强. 2006

作者其他论文 更多>>

微信小程序