利用rBE3和rBE4系统进行水稻基因单碱基编辑的特异性和遗传稳定性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任斌

作者： 严芳;旷永洁;李娜;张大伟;林宏辉;周焕斌

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9n;大鼠胞苷脱氨酶;脱靶效率;T-DNA分离;水稻

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2017 年 33 卷 10 期

页码： 1776-1785

收录情况： 北大核心

摘要： 对基于rBE3(Rice base editor)和rBE4碱基编辑系统创制获得Os SERK1(D428N)和pi-ta(S918F)等基因的单碱基编辑突变体材料进行编辑特异性和遗传稳定性分析,旨在全面了解和更好地利用该碱基编辑系统。首先对Os SERK1(D428N)和pi-ta(S918F)sg RNA的潜在脱靶位点进行预测,并对T0代材料中的各脱靶位点进行PCR扩增和Sanger测序检测;同时对该两个基因的突变体材料自交获得的T1代植株的靶位点序列和外源T-DNA分离进行检测。结果显示各T0代材料均未检测到潜在脱靶位点发生单碱基编辑;此外,Os SERK1(D428N)和Os08g07774含有相同的sg RNA位点,且两个位点均能发生单碱基编辑;rBE3或rBE4系统介导产生的碱基编辑可稳定遗传至T1代,并在T1代可获得无外源T-DNA的纯合突变体。上述结果表明由rBE3或rBE4介导的碱基编辑具有较高的特异性,可进行多位点编辑,引入的碱基替换可稳定遗传至后代。

分类号： Q943.2

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