绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贺三刚

作者： 贺三刚;张宁;张雪梅;刘明军;李文蓉

作者机构：

关键词： 绵羊;Noggin基因;序列分析;原核表达

期刊名称： 西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2012 年 21 卷 11 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。

分类号： S826`Q78

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