猪伪狂犬病毒野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 余波

作者： 余波;周思旋;谭诗文;徐景峨;史开志;杨莉

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病毒;野毒株;gE基因;荧光定量PCR;诊断试剂盒

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2014 年 43 卷 06 期

页码： 128-131+144

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得PRV gE基因片段,构建重组质粒pMD18-T-gE,作为阳性标准品。对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立猪PRV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断方法,研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰,无引物二聚体,对猪圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、PRV(gE基因缺失株)、猪源E.coli、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)均无阳性信号扩增,且重复性好,灵敏度可达2.3×101拷贝/μL。结果表明,研制的PRV野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR试剂盒特异、灵敏、快速、重复性好,适于伪狂犬病毒临床样品的检测。

分类号： S854.43

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