牛源溶血性曼氏杆菌YtfJ蛋白的表达及其对小鼠免疫原性的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 魏京京

作者： 魏京京;许淑芸;俞杰;魏增科;何白雪;周霞;吴洁;孙志华;王震;王晓兰;张辉;钟发钢

作者机构：

关键词： 溶血性曼氏杆菌;YtfJ基因;生物信息学;原核表达;抗原性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 007 期

页码： 731-738,756

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为分析牛源溶血性曼氏杆菌（Mh）YtfJ蛋白的免疫原性，本研究对YtfJ蛋白部分生物信息学特征分析后，利用原核系统表达并纯化重组YtfJ蛋白（rYtfJ），经SDS-PAGE、western blot检测rYtfJ的表达和纯化效果及其反应原性。结果显示YtfJ蛋白具有良好稳定的理化性质，并含有B细胞抗原表位与T细胞抗原表位，具有外膜蛋白结构特征。SDS-PAGE结果显示，在32.25 ku处出现目的蛋白，且纯化效果较好。Western blot结果显示rYtfJ能与牛源Mh阳性血清反应。将rYtfJ与白油佐剂乳化后以10μg/只、20μg/只和30μg/只经背部皮下注射免疫6周龄BALB/c小鼠，经眼眶采血后分离血清，通过间接ELISA检测不同时期各组小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平并计算IgG2a/IgG21比值，以及细胞因子分泌水平。结果显示，3种剂量蛋白免疫小鼠后，小鼠血清中IgG抗体水平逐渐升高，抗体水平于免疫后28 d和35 d达到监测期间内的最高值，整个免疫周期内IgG2a/IgG1均大于1，对照组与白油佐剂组小鼠无抗体产生；免疫后35 d 30μg组小鼠血清中IFN-γ含量极显著高于20μg组和10μg组（P<0.001）,30μg组和20μg组小鼠血清中IL-6的含量极显著高于10μg组（P<0.001）,21 d时30μg组小鼠血清中TNF-α和IL-10的含量极显著高于20μg组和10μg组（P<0.001）。首免后38 d对小鼠腹腔注射200μL（含3×10～8cfu/只）的Mh，观察15 d内各组小鼠的临床症状及死亡率，并剖杀所有存活小鼠，将肺组织研磨后稀释涂布于牛Mh固体培养基，通过菌落计数法测定小鼠肺脏载菌量。结果显示，攻毒后5 d内对照组和白油佐剂组小鼠全部死亡，眼角出现大量脓性分泌物且被毛凌乱，部分小鼠鼻部出血，30μg组、20μg组和10μg组小鼠的存活率分别为90%(9/10)、80%(8/10)和60%(6/10)，死亡小鼠被毛凌乱；各免疫组小鼠肺部载菌量与PBS对照组相比均降低，其中30μg组（P<0.001）和20μg组小鼠肺脏的载菌量（P<0.01）均极显著低于对照组与白油佐剂组。上述结果首次证实YtfJ蛋白能够与牛Mh阳性血清结合，且可以诱导小鼠产生体液免疫与细胞免疫反应，可有效抵抗Mh的感染。本研究为研发牛源Mh亚单位疫苗奠定基础。

分类号： S852.4

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