绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈思宇

作者： 陈思宇;张梦洁;田睿;陈益;刘镝钺;李文良;毛立;程子龙;杨蕾蕾;孙敏;张纹纹;杜改梅;储岳峰;王金泉;刘茂军

作者机构：

关键词： 绵羊肺炎支原体;EF-Tu蛋白;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年 33 卷 001 期

页码： 97-105

摘要： 绵羊肺炎支原体（Mo）是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原，危害严重；快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法，利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达，纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白，以纯化的rEF-Tu为包被抗原，建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示，原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa，与预期相符；Western blot证实具有良好的反应原性；建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示，包被抗原浓度为1.25 mg/L，37℃孵育2 h；封闭条件为30 g/L BSA，37℃孵育1 h；待检血清1∶100稀释，37℃孵育45 min；酶标二抗1∶20 000稀释，37℃孵育30 min；底物TMB 37℃避光反应15 min；样品OD450值≥0.296时判定为阳性，OD450值≤0.265时判定为阴性，OD450值0.265～0.296则判为可疑；组内和组间变异系数均低于10%；用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测，两者特异性为90.70%，敏感性为82.69%，符合率约为87.12%。上述结果表明，本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性，为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法，也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

分类号： S852.62

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