牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨立新

作者： 杨立新;朱远茂;周跃辉;任建乐;马磊;杨婷;薛飞

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;RT-PCR;p80蛋白;免疫印迹试验;单克隆抗体;IgM;间接免疫荧光试验

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2016 年 13 期

页码： 1-4+273

收录情况： 北大核心

摘要： 为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞(MDBK),提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体p ET30a,得到重组表达质粒p ET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44 ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6~8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光(IFA)和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明:重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDV p80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×105~1×107;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。

分类号： S852.4

  • 相关文献

[1]牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定. 王姝,朱远茂,蔡红,马磊,史鸿飞,吕闯,董秀梅,高欲燃,薛飞. 2013

[2]新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备. 胡非凡,梁齐章,黄瑜. 2023

[3]高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒间接免疫荧光鉴别方法的建立. 陈仕龙,黄梅清,林天龙,江斌,庄向生,陈少莺. 2009

[4]鸡LTBP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 滕蔓,迟佳琦,柴书军,罗俊. 2020

[5]PEDVN蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立. 邝燕齐,莫梅君,何红玲,周金柱,周如月,郭霄峰. 2020

[6]鸡异质核糖核蛋白AB单克隆抗体的制备及鉴定. 罗俊,党露,郑鹿平,刘金玲,柴书军,赵东,杨艳艳,滕蔓. 2022

[7]应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究. 李丹丹,张馨心,赵立平,相文华. 2008

[8]马立克病病毒单克隆抗体库构建及gB蛋白特异性单抗的筛选与鉴定. 李林燕,滕蔓,刘金玲,郑鹿平,柴书军,丁轲,余祖华,罗俊. 2023

[9]应用HEVORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究. 李丹丹,张馨心,赵立平,相文华. 2008

[10]猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定. 王瑞宁,王勋,李鸽,李青梅,李存法,杨苏珍,郭军庆. 2024

[11]牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备. 王雪枝,朱远茂,史鸿飞,严昊,蔡红,王姝,马磊,薛飞. 2014

[12]牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备. 王雪枝,朱远茂,史鸿飞,严昊,蔡红,王姝,马磊,薛飞. 2014

[13]通用型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用. 刘占悝,刘泽余,李智杰,孙飞雁,郭利. 2020

[14]RT-PCR快速检测牛病毒性腹泻病毒方法的建立与应用. 张俭伟,赵宏坤,杨少华,高运东,王长法,仲跻峰. 2008

[15]牛病毒性腹泻病毒Nano-PCR检测方法的建立及初步应用. 李健友,刘泽余,刘占悝,李家伟,张淑琴,王超,郭利. 2018

[16]牛病毒性腹泻病毒、宋内氏痢疾杆菌混合感染致仔鹿腹泻的研究 被引量:1. 乔连江,张萍,程悦宁,刘泽余,张海威,周玉成,周曼丽,徐莉,侯庆丰,杨艳玲. 2019

[17]牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体捕获ELISA方法的建立. 钟发刚,程安春,王新华,邓宇,郭燕. 2008

[18]牛病毒性腹泻病毒荧光标记单克隆抗体的制备及鉴定. 徐树兰,李少英,赵俊,武华. 2011

[19]牛病毒性腹泻病毒E2蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立. 刘鑫欢,何苗锋,张纹纹,程子龙,毛立,杨蕾蕾,刘茂军,白娟,李文良. 2023

[20]甘薯潜隐病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定. 乔奇,张振臣,秦艳红,张德胜,田雨婷. 2017

作者其他论文 更多>>

微信小程序