柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 平宪卿

作者： 平宪卿;韩红玉;黄兵;姜连连;董辉;赵其平;李洋;郭涛;朱顺海

作者机构：

关键词： A08基因;柔嫩艾美耳球虫;荧光实时定量PCR;毕赤酵母;表达

期刊名称： 西南大学学报(自然科学版)

ISSN： 1673-9868

年卷期： 2011 年 33 卷 06 期

页码： 19-24

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoRI和NotI酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用SacI将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.

分类号： S852.723

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