冻融联合灌注法优化大鼠肾脏脱细胞支架的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 胡东

作者： 胡东;张德迎;刘博;周宇;余熠杭;沈炼桔;龙春兰;刘星;林涛;何大维;魏光辉

作者机构：

关键词： 组织工程;肾脏;脱细胞支架;冻融法;灌注法

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2019 年 02 期

页码： 307-318

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在探索优化肾脏脱细胞支架的制备方法,为肾脏组织工程及肾脏体外病理、毒理研究提供实验基础。取大鼠肾脏灌注PBS作为对照组(Control组),在不同流速下分别以十二烷基磺酸钠(Sodiumdodecyl sulfate,SDS)灌注(S组),Triton X-100联合SDS灌注(TS组),反复冻融后Triton X-100联合SDS灌注(FTS组),制备肾脏脱细胞支架,并测定其流体分布及脉管阻力。HE染色、DAPI染色、DNA定量检测脱细胞支架脱细胞程度,Masson染色、PAS染色、免疫组织化学染色检测脱细胞支架主要成分的保留和结构的完整,扫描电镜检测支架的超微结构,MTT法检测支架的细胞毒性,ELISA检测支架中生长因子的含量。结果显示,FTS组脱细胞用时较S组、TS组少,10 mL/min组支架脉管阻力较低,S组、TS组、FTS组流体分布与Control组存在差异。HE染色和DAPI染色显示各组支架未见细胞成分残留,DNA含量<50 ng/mg。Masson染色和PAS染色可见细胞外网状胶原及多糖,免疫组织化学染色见Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅳ型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、层粘连蛋白(Laminin)表达。扫描电镜见支架呈蜂窝状结构。MTT法检测支架细胞毒性分级在0–1级之间。ELISA检测提示FTS组VEGF、EGF、IGF-1、PDGF含量明显高于S组和TS组。综上,联合冻融和灌注法能够制备更为理想且有效的大鼠肾脏整器官脱细胞支架,为肾脏组织工程及肾脏体外病理、毒理学研究奠定基础。

分类号： R318.08

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