伪狂犬病病毒Min-A株gE基因序列分析及其真核表达质粒的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冉智光

作者： 冉智光;童光志;张绍杰;王玉春;黄勇富

作者机构：

关键词： 伪狂犬病病毒；PCR；gE基因；DNA序列；表达质粒

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 1999 年 02 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已发表的伪狂犬病毒（ＰｒＶ）的基因序列，在ＰｒＶｇＥ基因起始密码子和终止密码子的上、下游分别设计一对引物ＰＣＬ１和ＰＣＬ２，在ＰＣＬ１和ＰＣＬ２的５端分别加上ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ位点，以ＰｒＶＭｉｎ－Ａ株ＤＮＡ为模板成功地扩增到约１．８ｋｂ的片段，经酶切鉴定为ＰｒＶｇＥ基因。将此ＰＣＲ产物以ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ消化，回收后与经ＫｐｎＩ／ＢａｍＨＩ酶解的ｐＵＣ１１９连接、转化，获得了明显大于载体的重组质粒，经限制性酶切和序列部分测定鉴定了阳性重组质粒ｐＲＺＥ。将ｐＲＺＥ分别经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ酶切，回收ｇＥ基因，分别克隆到真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ和杆状病毒载体ｐＶＬ１３９２上，获得ｐＣＲＥ和ｐＶＬＥ重组子。为下一步构建重组病毒并在昆虫细胞和哺乳细胞中表达ＰｒＶｇＥ糖蛋白奠定了基础。

分类号： Q786,Q786

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