海南万宁咖啡炭疽病菌Colletotrichum siamense的分离鉴定及LAMP快速检测体系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 温思为

作者： 温思为;高圣风;田甜;刘世超;苟亚峰;张若男;薛超;孙世伟

作者机构：

关键词： 咖啡炭疽病;病原鉴定;环介导等温扩增(LAMP);检测

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2025 年 46 卷 007 期

页码： 1733-1744

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 作为海南省万宁市特色农业支柱产业，兴隆咖啡产业的可持续发展正面临炭疽病侵害的严峻挑战。咖啡炭疽病可导致咖啡叶片焦枯、枝条溃疡及浆果褐腐，是咖啡的主要病害之一。本研究在万宁咖啡主产区采集咖啡炭疽病样品并分离病原菌，通过ITS、TUB2、CHS-1、ACT、GAPDH多基因联合分析鉴定病原菌，并基于环介导等温扩增技术（LAMP）建立快速检测体系。结果表明：（1）采集典型病样50份，经组织分离纯化获得炭疽菌株24株；（2）明确万宁5个种植区的病原种群结构包含4个炭疽菌种，即Colletotrichum tropicale、C.karstii、C.fructicola及优势种暹罗炭疽菌（C.siamense,45.8%）。（3）基于TUB2基因特异区域，设计筛选得到特异性LAMP引物组Tub-L1，优化反应体系参数为63℃恒温扩增50 min，内外引物浓度比为8∶1,Mg2+8 mmol/L,d NTPs 0.8 mmol/L，无需甜菜碱。验证试验表明，该体系检测灵敏度达100 pg/μL（为常规PCR的10倍）；对炭疽菌属的7个近缘种（C.tropicale、C.fructicola、C.karstii等）及7种非靶标植物病原菌[含咖啡驼孢锈菌（Hemileia vastatrix）、菜豆间座壳菌（Diaporthe phaseolorum）等]均无阳性反应。采用优化后的LAMP检测体系对田间采集的病害叶片样本进行分析，所有样品均成功检测出暹罗炭疽菌，其结果与常规PCR检测方法一致。综上所述，本研究建立并优化的咖啡炭疽病菌LAMP快速检测体系具有操作简便、反应高效、特异性强、灵敏度高以及结果可视化等优势，适用于暹罗炭疽菌（C.siamense）的田间快速检测。该体系为咖啡炭疽菌的精准鉴定及高效检测提供了可靠的技术支撑，对咖啡炭疽病的早期预警、病害监测及综合防控具有重要的实践意义和应用价值。

分类号： S435.712

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