颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对A549细胞的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晚霞

作者： 王晚霞;兰喜;徐向红;居军;柳纪省

作者机构：

关键词： 颗粒溶素;穿孔素;人肺癌A549细胞;FMDV2A

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2009 年 29 卷 10 期

页码： 12-17

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pGNLY-2A-PFP,观察其在人肺癌A549细胞中的表达情况。方法:体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段,并将其分别插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后构建pIRES-GNLY、pIRES-PFP及pGNLY-2A-PFP并转染人肺癌A549细胞,RT-PCR和间接免疫荧光检测目的蛋白表达,流式细胞Annexin V/PI检测转染后细胞凋亡情况。结果:成功获取了人颗粒溶素和穿孔素cDNA,构建了真核表达载体pIRES-GNLY、pIRES-PFP、pGNLY-2A-PFP,转染A549细胞后检测出了目的蛋白的表达,pGNLY-2A-PFP转染组细胞死亡率高于其他对照组(P<0.05),死亡细胞以凋亡为主。结论:人颗粒溶素和穿孔素基因可以在人肺癌A549细胞中表达,二者共表达能够促进细胞凋亡,这将有助于颗粒溶素和穿孔素在肿瘤治疗中应用的后续研究。

分类号： Q78

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