棉花酵母双杂交文库构建及GhbHLH149-like互作蛋白筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘迪

作者： 刘迪;甄军波;刘琳琳;封丛华;冯晓晴;迟吉娜

作者机构：

关键词： 棉花;酵母双杂交;互作蛋白;GhbHLH149-like

期刊名称： 核农学报

ISSN： 1000-8551

年卷期： 2025 年 39 卷 008 期

页码： 1657-1664

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： basic helix-loop-helix（bHLH）是植物中广泛存在的一类转录因子，在植物生长发育及非生物胁迫响应中起重要作用，其中GhbHLH149-like基因的表达受盐胁迫诱导。为筛选鉴定与GhbHLH149-like互作的蛋白并从分子层面解析GhbHLH149-like在棉花幼苗盐胁迫响应中的调控机制，本研究以陆地棉品种JZ-1为材料，构建了陆地棉酵母双杂交混合cDNA文库。结果表明，获得的初级文库库容量为1.12×10～7 CFU，次级文库库容量为1.44×10～7 CFU，两种文库重组率皆为100%，插入片段的平均长度大于1 000 bp，酵母文库滴度为1.40×10～8 cells·mL-1。文库质量合格，满足后续酵母双杂交筛选要求。成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-GhbHLH149-like，经鉴定其对酵母菌株无毒性，且无自激活活性。利用诱饵载体对文库进行酵母双杂交筛选，共筛选出8个与GhbHLH149-like互作的候选蛋白，并进行酵母回交一对一验证进一步确认互作关系。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果显示候选互作蛋白KNOX1-4和EF-Tu的编码基因的表达明显受盐处理诱导。相关结果为进一步研究GhbHLH149-like参与调控棉花幼苗盐胁迫响应的分子机制奠定了理论基础。

分类号： S562

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