文献类型： 中文期刊
第一作者： 楼晶瑶
作者： 楼晶瑶;王晓丽;欧阳伟;夏兴霞;诸玉梅;潘群兴;王晶宇;安欣;姚凌云;王永山;刘永杰
作者机构：
关键词： 犬流感病毒;NP蛋白;杆状病毒表达系统;间接ELISA
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2017 年 06 期
页码： 680-686
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 旨在利用昆虫细胞表达犬流感病毒(CIV)核蛋白(NP),并以此作为抗原建立检测CIV抗体的间接ELISA方法。从CIV感染的MDCK细胞中提取总RNA,用RT-PCR法扩增NP基因,连接到pFastBacHTA载体上,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒NP-DH10,穿梭质粒转染sf-9昆虫细胞,获得重组病毒P1-NP。病毒传至第3代后,用Western-blot及IFA鉴定昆虫细胞表达的蛋白与兔抗犬流感病毒NP蛋白多克隆抗体及鼠抗CIV血清发生特异性反应。NP蛋白纯化后作为抗原,建立检测CIV抗体的间接ELISA方法。优化后确定蛋白最佳包被浓度为2 g/mL,血清最佳稀释度为1∶100。用建立的间接ELISA方法和血凝抑制(HI)同时检测136份血清样品,ELISA法检出129份阳性,检出率为94.85%;HI检出120份阳性,检出率为88.23%,二者符合率为93.38%,ELISA检测方法的阳性率高于血凝抑制。结果表明,利用昆虫细胞表达的NP蛋白做为抗原,建立的检测CIV抗体的间接ELISA方法特异性好,重复性高,可用于犬流感的诊断和流行病学调查。
分类号： S852.659.5
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