鸡MHC Iα-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘光亮

作者： 刘光亮;童铁钢;王群;肖一红;孟庆文;吴东来

作者机构：

关键词： 鸡MHC克隆;生物素化序列;表达;纯化

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2006 年 14 卷 5 期

页码： 662-668

收录情况： CSCD

摘要： 实验克隆了莱航鸡(Gallusgallus)MHC Iα(BF2)(GenBank登陆号:AY989897)全基因,分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-BF2-BSP,在大肠杆菌(Escherichia coli)中得到表达,并优化了诱导剂浓度、起始诱导菌体浓度及诱导时间等表达条件.SDS-PAGE分析结果表明所得融合目的蛋白约为40 kD,Western-blot结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签;pET-BF2-BSP最优化表达条件分别为:菌体起始诱导浓度OD600nm0.8～1.2,IPTG诱导浓度1.1 mmol/L,诱导时间2～4 h;建立了该重组蛋白变性状态下通过镍柱亲和层析纯化包涵体的方法.实验获得了高纯度的在体外构建鸡MHC-肽四聚体所需的重组蛋白BF2-BSP.

分类号：

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