肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 史冰田

作者： 史冰田;王高玲;郭杰;司微;李涛

作者机构：

关键词： 肠炎沙门菌;鞭毛蛋白;原核表达;阳性血清;生物活性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2016 年 01 期

页码： 8-12

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体。用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800。上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础。

分类号： S852.4

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