鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建

文献类型: 中文期刊

第一作者: 包晓玮

作者: 包晓玮;王笑梅;高宏雷;祁小乐;付朝阳;张厚双;彭志伟

作者机构:

关键词: 鸡传染性法氏囊病病毒;Gx株全长cDNA,感染性分子克隆

期刊名称: 中国预防兽医学报

ISSN: 1008-0589

年卷期: 2006 年 28 卷 04 期

页码: 369-374

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 本研究以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5'端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,基因组B节段全长共2843个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和一个开放阅读框。将IBDV-Gx株的A节段全长基因组及B节段全长基因组分别克隆入pMD18-T载体,构建成pMD-A、pMD-B两个带有T7启动子的重组质粒。两个重组质粒线性化后,进行体外转录,然后共电转染于鸡胚成纤维细胞37℃培养72h并传代。收获的细胞传代培养物分别用RT-PCR、间接免疫荧光、蚀斑试验等方法进行鉴定,结果用RT-PCR扩增出了VP3及VP5基因片段,间接免疫荧光检测到了特异性的荧光抗体,蚀斑试验结果表明蚀斑形成单位为3×103PFU/mL。

分类号: S852.65

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