鸭肠炎病毒VP22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王克雄

作者： 王克雄;李慧昕;李阳;邵昱昊;韩宗玺;马小军;刘胜旺;孔宪刚

作者机构：

关键词： 鸭肠炎病毒;VP22蛋白;单克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 09 期

页码： 721-725

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了制备抗鸭肠炎病毒(DEV)VP22蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以DEV Clone-03基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增UL49基因并克隆至pMD-18载体。重组质粒经测序鉴定后,将UL49基因亚克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒pET-30a-UL49。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,在大肠杆菌中获得表达,并对表达的重组蛋白VP22进行western blot鉴定。结果显示,表达的重组蛋白分子量约为36ku,与预期的大小一致。重组蛋白能够被鼠抗DEV阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。将重组蛋白纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,制备MAb,经间接ELISA、western blot和间接免疫荧光试验进行筛选及鉴定,获得4株能够稳定分泌抗DEVVP22蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2B10、2G1、3F10和3G2。其MAb亚类分别属于IgG2b、IgG2b、IgA和IgM。4株MAbs都能够与DEV Clone-03发生特异性反应,表明能够识别天然构象的VP22蛋白。这4株MAb可用于DEV VP22蛋白功能研究及抗原表位的研究。

分类号： S852.65

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