鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙芬芬

作者： 孙芬芬;高玉龙;潘伟;王笑梅

作者机构：

关键词： 鸡传染性贫血病毒;VP1蛋白;原核表达;纯化;兔抗血清

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2018 年 17 期

页码： 175-177

收录情况： 北大核心

摘要： 通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a(+)载体连接,获得阳性重组子p ET-28a-VP1Nd129,将其转化入E.coli BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达出VP1Nd129蛋白;后者通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示,CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达,并主要以包涵体形式存在;纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达,制备的兔抗血清反应性好,为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。

分类号： S852.65

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