利用PLDMV/Twin-Strep侵染性克隆纯化HC-Pro病毒蛋白

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨秀坤

作者： 杨秀坤;沈文涛;庹德财;王赫;言普;黎小瑛;朱国鹏;周鹏

作者机构：

关键词： 番木瓜畸形花叶病毒;HC-Pro;马铃薯Y病毒;蛋白纯化

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2022 年 43 卷 004 期

页码： 684-692

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯化获得具有功能活性的HC-Pro蛋白,研究其多功能性具有重要意义.本研究利用In-Fusion拼接策略和E.coli Cell-Free快速构建植物病毒侵染性克隆法,一步快速地将28个氨基酸组成的蛋白标签Twin-Strep插入到PLDMV HC-Pro氨基端,成功获得了基于农杆菌的携带Twin-Strep标签的PLDMV侵染性克隆pPLDMV-Strep.通过农杆菌渗透注射接种番木瓜植株,从感染PLDMV-Strep的番木瓜叶片总蛋白中,利用Twin-Strep蛋白标签亲和层析分离纯化获得PLDMV HC-Pro蛋白,并通过LC/ESI-MS/MS(liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometric)对其进行蛋白N端和C端序列测序,证明了纯化获得完整的PLDMV HC-Pro蛋白.研究结果为后续解析PLDMV HC-Pro在病毒侵染过程中的功能及与寄主蛋白相互作用奠定了基础.

分类号： S436.67

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