小菜蛾ISSR-PCR反应体系的建立与正交设计优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨家强

作者： 杨家强;王相晶;郭兆将;朱勋;吴青君;谢文;王少丽;徐宝云;张友军

作者机构：

关键词： 小菜蛾;ISSR;正交设计;反应体系

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2012 年 38 卷 06 期

页码： 90-94

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以小菜蛾(Plutella xylostella)基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计方法,建立小菜蛾的ISSR最佳反应体系。通过梯度退火试验,确定不同引物的最适退火温度。优化得到的反应体系(20μL)为:Mg2+浓度1.5mmol/L、Taq DNA聚合酶2.5U、dNTPs浓度0.2mmol/L、引物浓度1.25μmol/L、模板DNA量20ng。反应程序为:94℃预变性5.0min;94℃变性45.0s,40～61℃(不同引物退火温度各异)退火1.0min,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10.0min;10℃保存。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,获得了清晰、重复性好的DNA谱带。

分类号： S433.4

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