牦牛"海绵吸附"bta-miR-146a的lncRNA筛选及靶向验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王运路

作者： 王运路;孟朝轶;姚一龙;郭敏;牛家强;索朗斯珠;徐业芬

作者机构： 西藏农牧学院动物科学学院;中国农业科学院深圳农业基因组研究所;中国农业大学动物科学技术学院;西藏大学农牧学院

关键词： 牦牛;海绵吸附;lncRNA;bta-miR-146a

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 859-869

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】筛选牦牛卵泡发育过程中可能对靶向Smad家族成员4（Smad family member 4,Smad4）基因的bta-miR-146a具有“海绵吸附”作用的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）。【方法】使用miRanda和RNAhybrid数据库对靶向牦牛bta-miR-146a的lncRNA进行预测；采集牦牛卵巢，分离健康、闭锁卵泡，用Trizol法提取RNA并反转录为cDNA,利用PCR检测所预测lncRNA的表达情况；利用实时荧光定量PCR法检测所筛选lncRNA和bta-miR-146a/Smad4在牦牛健康、闭锁卵泡中的表达情况；构建lncRNA-ENSBGRT00000000387.1的野生型和突变型双荧光素酶载体，将其与bta-miR-146a-mimics、mimics NC共转染至HEK293T细胞，检测双荧光素酶活性。【结果】试验共筛选出7个可能对靶向Smad4基因的bta-miR-146a具有“海绵吸附”作用的lncRNAs,其中的lncRNA-ENSBGRT00000000387.1在牦牛卵泡中表达量极显著高于其他lncRNAs（P＜0.01）。实时荧光定量PCR检测发现，lncRNA-ENSBGRT00000000387.1、bta-miR-146a和Smad4基因mRNA在牦牛健康和闭锁卵泡中共表达，且lncRNA-ENSBGRT00000000387.1和Smad4基因mRNA在牦牛健康卵泡中的表达量均显著高于闭锁卵泡（P＜0.05）,bta-miR-146a在牦牛健康卵泡中的表达量极显著低于闭锁卵泡（P＜0.01）。试验成功构建牦牛lncRNA-ENSBGRT00000000387.1野生型及突变型pmirGLO双荧光素酶报告质粒，双荧光素酶活性结果显示，bta-miR-146a mimics对牦牛lncRNA-ENSBGRT00000000387.1-WT具有极显著下调作用（P＜0.01）。【结论】lncRNA-ENSBGRT00000000387.1、bta-miR-146a和Smad4基因mRNA可能在牦牛卵泡发育或闭锁过程中存在调控机制，并在体外初步证实lncRNA-ENSBGRT00000000387.1与bta-miR-146a具有“海绵吸附”作用，这为进一步研究lncRNA-ENSBGRT00000000387.1在牦牛卵泡中的功能机制提供依据。

分类号： S823.85

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