苦瓜MAP30蛋白基因克隆、表达及其抗肿瘤活性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林育泉

作者： 林育泉;周鹏;曾召绵

作者机构：

关键词： MAP30;克隆　表达;纯化;活性分析

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1003-3505

年卷期： 2005 年 25 卷 05 期

页码： 60-66

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET 30a中,构建成带有N端6His tag的融合表达载体。表达载体用CaCl2 介导的化学转化法转化E .coliBL2 1 (DE3) ,然后利用PCR筛选阳性克隆。工程菌经1mmol/LIPTG诱导4h实现高效表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白5 6%。可溶性分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在。重组蛋白通过Ni2 +鏊合亲和层析进行纯化,纯化蛋白占上清总蛋白37. 2 % ,发酵液产率为2 5 0mg/L。Westernblot分析表明,重组蛋白可与兔抗his tag多克隆抗体发生特异性反应。利用MTT法分析重组MAP30的细胞毒性,结果表明其对小鼠3T3和S 1 80肿瘤细胞株具有明显的抑制作用,ID50 分别约为5 0 μg/ml和3 0mg/ml,而对人正常胚肺二倍体WI 38细胞株的毒性极小。

分类号： S642.5

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