猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 万颖

作者： 万颖;周改静;麻园;石正旺;肖书奇;罗俊聪;宋锐;曹丽艳;杨波;王丽娟;田宏;郑海学

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;N蛋白;抗体检测;阻断ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年 53 卷 004 期

页码： 1173-1181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法.本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验.对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较.结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL-1,血清最佳稀释比例为1:1;酶标抗体的最佳工作浓度为1 ∶ 5 000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1:16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1:32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致.综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测.

分类号： S852.659.6

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