星康吉鳗fshβ的鉴定及重组蛋白可溶性表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈彦

作者： 陈彦;陶美君;史宝;王成刚;薄万军;李文龙;晏科文;赵新宇

作者机构：

关键词： 星康吉鳗;促卵泡激素β亚基(fshβ);基因鉴定;序列特征分析;可溶性表达

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2025 年 46 卷 005 期

页码： 158-170

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)在鱼类配子发生早期阶段发挥重要的调控作用。通过同源克隆获得星康吉鳗(Conger myriaster) fshβ基因的编码序列(CDS)，利用生物信息学软件分析该基因编码蛋白的结构与特征，采用原核表达系统对FSH蛋白进行可溶性表达。克隆获得fshβ的CDS区为378 bp，编码125个氨基酸。对序列特征进行分析，fshβ存在保守性较强的GHB(由19～122位的104个氨基酸组成)结构域，相对分子质量为13.19 kDa，理论等电点为6.00，为亲水性蛋白。fshβ的前1～19个氨基酸为信号肽，无跨膜区；存在2个N-糖基化位点、3个O-糖基化位点和14个磷酸化位点，主要定位于细胞核。fshβ的二级结构主要含有α-螺旋(12.0%)、β-折叠(24.8%)、无规则卷曲(63.2%)；其三级结构与日本鳗鲡(Anguilla japonica)、美洲鳗鲡(A. rostrata)、欧洲鳗鲡(A. anguilla)、花鳗鲡(A. marmorata)的fshβ的三级结构较为相似。多序列比对及系统发育树分析显示，星康吉鳗fshβ与日本鳗鲡、美洲鳗鲡、欧洲鳗鲡、花鳗鲡具有较高的同源性，为68.50%～70.08%。构建了重组表达载体pET-28a-FSH，转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中，以IPTG作为诱导剂进行了诱导表达。经SDS-PAGE鉴定，发现fshβ重组蛋白主要在上清液中表达，分子量大小与预期一致。采用亲和层析纯化的方法获得了纯度较高的重组fshβ蛋白。经Western Blot检测显示，在约26.0 kDa处有特异性条带，表明fshβ重组蛋白成功表达。本研究成功克隆星康吉鳗fshβ，并对其序列特征进行生物信息学分析；利用原核表达系统成功表达fshβ重组蛋白，对后续探究星康吉鳗fshβ的调控机制及功能奠定基础，同时对星康吉鳗人工繁育技术的发展提供了新思路。

分类号： S917.4

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