表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的重组乳酸菌的构建及蛋白免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴桐忠

作者： 吴桐忠;努尔赛力克·努素甫;黄新;韩猛立;张星星;张倩;王新华;何延华;钟发刚

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒（BVDV）;E2基因;乳酸乳球菌;免疫原性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2021 年 008 期

页码： 2975-2981

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在构建能表达牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV） E2抗原蛋白的重组乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）,为进一步研制BVDV乳酸菌口服活载体疫苗奠定基础。将BVDV E2基因克隆后测序,根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性进行优化,再将优化的基因片段插入表达载体pNZ8148中,并电转化乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞,构建重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000,经1 ng/mL乳链菌肽诱导表达后,对菌体物进行了SDS-PAGE和Western blotting分析。将重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000口服免疫6～12月龄健康犊牛,在免疫后不同时间点采集血液样品并分离血清,用间接ELISA方法检测抗体水平。结果显示,PCR扩增到了1 149 bp的目的片段,乳酸菌密码子偏嗜性优化后,GC含量从45.28%变为34.30%。重组质粒pNZ8148-E2经酶切鉴定插入片段与预期大小相符,在菌体裂解物中出现大小约42 ku的条带,与预期蛋白大小一致,且该蛋白可与BVDV E2抗体反应。在免疫犊牛的血清中检测到特异性抗BVDV E2蛋白的抗体。本研究结果表明,表达BVDV E2蛋白的重组乳酸菌口服免疫可诱导犊牛产生特异性的体液免疫反应,该重组菌具有较好的免疫原性。

分类号： S852.653

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