猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苏文强

作者： 苏文强;胡鑫宇;王秋霞;欧长波;郭爱疆;李辉;骆学农;余燕;张艳红;姜金庆;刘兴友;马金友;王松;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴;凋亡蛋白酶抑制基因;API蛋白;原核表达

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。

分类号： S852.7

  • 相关文献

[1]猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析. 刘振勇,吕志慧,郑亚东,窦永喜,乔军,骆学农,张艳,景志忠,才学鹏. 2010

[2]猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化. 王秋霞,张美英,张改平,王选年,宁长申,鲁琨,张龙现,菅复春. 2009

[3]猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达. 赵光辉,王秋霞,鲁琨,张改平,宁长申,王选年,张龙现,菅复春,宋海涛. 2008

[4]猪囊尾蚴rTS-CC18蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析. 张少华,才学鹏,贾万忠,骆学农,刘红霞,赵松波,景志忠. 2009

[5]猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达条件优化及多抗制备. 宋军科,于三科,骆学农,窦永喜,林青,才学鹏. 2012

[6]猪囊尾蚴TsCL-1基因的原核表达. 宋军科,才学鹏,窦永喜,骆学农,林青. 2010

[7]猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立. 张少华,骆学农,贾万忠,郭爱疆,景志忠,才学鹏. 2009

[8]基于猪囊尾蚴M13h蛋白的ELISA方法的优化. 王秋霞,马景周,宁长申,张龙现,菅复春. 2011

[9]猪囊尾蚴病——猪囊虫病的诊治与公共卫生安全. 刘江水,郭保民,赵景娣,吉鹏华,辛庆强. 2009

[10]基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立. 吴国华,郑亚东,贾万忠,张少华,景志忠,骆学农,刘石泉,才学鹏. 2009

[11]重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达. 郭爱疆,才学鹏,贾万忠,房永祥,乔军,刘红霞,潘小梅,景志忠. 2009

[12]CpGODN增强猪囊尾蚴病疫苗免疫反应的试验研究. 景志忠,王佩雅,蒙学莲,窦永喜,陈涓,骆学农,才学鹏. 2004

[13]猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估. 刘斌,才学鹏,郭爱疆,骆学农,陈晓宇. 2008

[14]猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及其血清学检测效果评价. 张少华,才学鹏,贾万忠,骆学农,郑亚东,景志忠,刘红霞,赵松波. 2008

[15]猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达. 王秋霞,苏文强,关俊勇,郭爱疆,骆学农. 2016

[16]猪带绦虫AgB与猪CD58或IFN-γ共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达. 侯俊玲,景志忠,郑亚东,胡志敏,骆学农,蒙学莲,窦永喜,刘军龙,才学鹏. 2007

[17]猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达. 李海龙,景志忠,姜悦平,才学鹏. 2006

[18]猪囊尾蚴CE18重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定. 张少华,贾万忠,骆学农,景志忠,吴国华,郑亚东,郭爱疆,才学鹏. 2008

[19]人工感染猪囊尾蚴的组织结构观察. 孙晓林,骆学农,景志忠,王佩雅,才学鹏. 2008

[20]猪囊尾蚴T24基因的克隆、表达及免疫原性分析. 李海龙,景志忠,姜悦平,才学鹏. 2006

作者其他论文 更多>>

微信小程序