文献类型： 中文期刊
第一作者： 倪健强
作者： 倪健强;张春玲;童光志;仇华吉;王云峰;田志军
作者机构：
关键词： PRV;gE;鉴别诊断
期刊名称： 生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2004 年 20 卷 04 期
页码： 58-63
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据伪狂犬病病毒 (PRV)Min A株gE基因序列 ,利用PCR方法扩增了PRVgE基因不含信号肽、胞内区和跨膜区的主要抗原表位区 ,并克隆到原核表达载体pGEX 6p 1中 ,获得的重组质粒命名为pGEX tgE。经SDS PAGE电泳分析证实克隆的部分gE基因获得了表达 ,融合表达产物大小约为 6 3kD ,并在终浓度为 0 6mmol L的IPTG诱导下 ,3 5h其表达量达到高峰。通过改变诱导条件 ,有效抑制了包涵体形成 ,提高了重组蛋白的溶解性。Westernblot分析证实表达的重组gE蛋白具有抗原反应活性。将表达产物利用亲和层析法纯化后作为ELISA抗原 ,通过对其特异性、敏感性及工作条件的优化试验 ,和对 4 8份PRV阴性血清样品的检测结果的统计学分析 ,建立了猪伪狂犬病tgE ELISA鉴别诊断方法。通过对 4 0 0份送检血清样品的检测结果分析 ,表明其与PRV全病毒ELISA试验的符合率高达 95 %以上 ,与基于抗gE蛋白单抗竞争性ELISA的符合率达 94 %。此方法可用于gE基因缺失PRV疫苗免疫动物和PRV自然感染动物的鉴别诊断
分类号： S852.65
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