苏云金芽孢杆菌cry1Aa14基因的分离、克隆及其表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任莹博

作者： 宋福平;陈中义;李国勋;王勤英;黄大昉;张杰

作者机构：

关键词： 苏云金芽孢杆菌;cry1Aa14基因;克隆;表达;杀虫活性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2004 年 12 卷 02 期

页码： 188-191

收录情况： 北大核心

摘要： Bt25是中国自行分离的对小菜蛾(Plutellaxylotella)具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis),经PCR-RFLP鉴定含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法,设计1对特异引物,以Bt25质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因。序列测定结果表明, 该基因编码区为3 552 bp,编码1 183个氨基酸,分子量为133.7 kD,pI 4.755。该基因序列已在GenBank注册,登记号为AY197341,并获得正式命名cry1Aa14。在氨基酸序列918~1180间,和已知的11种Cry1Aa存在22~23个氨基酸的差异(其中1094~1097的4个氨基酸无对应序列),而这段区域和Cry1Ab氨基酸序列的对应区域无差异。cry1Aa14全长基因插入Bt表达载体,获得了重组表达质粒pBYB1,转化Bt无晶体突变株HD73cry-,经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测,证实转化成功。SDS-PAGE分析表明,该基因在上述受体中能正常表达133 kD蛋白。杀虫生物测定结果表明,cry1Aa14表达产物对小菜蛾幼虫具有显著的毒杀作用,与cry1Aa12进行比较,毒力无明显差异。这种单基因菌株的发现及其基因的获得,为害虫抗性研究和高效工程菌的构建提供了重要实验材料。

分类号： Q786

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