PCR扩增的shRNA表达盒快速筛选PRRSV有效siRNA序列

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贺云霞

作者： 贺云霞;华荣虹;周艳君;安同庆;仇华吉;王云峰;童光志

作者机构：

关键词： RNA干扰;siRNA;短发夹RNA(shRNA);猪繁殖与呼吸综合征病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2007 年 29 卷 05 期

页码： 376-380

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步PCR法产生包含U6启动子的短发夹RNA表达盒技术快速筛选高效siRNA,PCR法制备的shRNA表达盒(PCR-shRNA95、PCR-shRNA179、PCR-shRNA218和PCR-shRNA294)分别与表达N-EGFP融合蛋白的重组质粒pEN-ORF7共转染至293T细胞,48 h后荧光显微镜下检测细胞表达EGFP阳性率,筛选有效siRNA片段,将筛选的PCR-shRNA179的PCR产物转染N-EGFP融合蛋白稳定表达293T细胞系和PRRSV感染的Marc-145细胞,结果表明PCR-shRNA179可明显减少N蛋白的表达、有效减轻PRRSV引起的细胞病变及减少感染PRRSV的Marc-145细胞中的N蛋白阳性细胞。本研究证明一步PCR扩增shRNA表达盒法可用于筛选特异性基因表达抑制的siRNA。

分类号： S852.65

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