尘螨变应原Der fl全序列的原核表达及生物信息学分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔玉宝

作者： 崔玉宝;周鹏;彭明;彭江龙;周鹰

作者机构：

关键词： 尘螨;Der;fl;原核表达;生物信息学

期刊名称： 四川动物

ISSN： 1000-7083

年卷期： 2008 年 000 卷 001 期

页码： 37-43

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 构建尘螨变应原Der fl原核表达体系,并了解其分子特征.方法 提取粉尘螨总RNA,用RT―PCR合成Der fl编码基因,将其克隆至pMD19-T载体,亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化至大肠杆菌并刚IPTG诱导表达.用生物信息学软件对测序结果进行分析并预测其空间结构.结果从粉尘螨总RNA中扩增获得Der fl cDNA片段,成功构建了表达质粒pET-28a(+)-Der fl,Western blotting显示原核表达获得成功.测序结果提交GenBank,臀陆号为EU095368,该基因长966bp,与参考序列同源性达99.9％,推测其编码氩基酸321个,属疏水蛋白,位于细胞外,信号肽位于1~18氨基酸处.同源性分析提示Der fl和Eur ml相似率为88％,而Der fl和Derpl的相似率为77％,分子进化树中粉尘螨和梅氏嗜霉螨聚成一簇.Derfl的二级结构由α-螺旋(109aa,33.96％)、延伸链(55aa,17.13％)、β-转角(18aa,5.61％)和随机卷曲(139aa,43.30％)组成:结论 尘螨变麻原Der fl原核表达获得成功,为进一步生产重组变麻原奠定了基础.生物信息学分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合.

分类号： Q78

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