人参尖镰孢菌原生质体制备条件优化及绿色荧光蛋白转化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴照群

作者： 吴照群;卢宝慧;王莹;王苏宁;岳琪;杨翠;高洁

作者机构：

关键词： 尖镰孢菌;原生质体;制备条件;荧光信号

期刊名称： 吉林农业大学学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 414-419

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为人参根腐病菌的侵染及防治提供可视化的检测和分析手段,通过摸索分生孢子最适萌发时间、酶解液组成、酶解温度、摇床转数及渗透压稳定剂种类,研究人参根腐病菌-尖镰孢菌（Fusarium oxysporum）原生质体制备技术。结果表明:将人参尖镰孢菌野生型菌株0083分生孢子在YEPD培养基中培养11 h,酶解温度37℃、摇床转数180 r/min,渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl的条件下,酶解液（崩溃酶、溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶质量浓度分别为0.01,0.03,0.02,0.005 g/mL）酶解0.25 g菌丝时,收获的菌丝体最有利于原生质体的形成和释放,共获得2.8×107/mL原生质体。用聚乙二醇PEG介导外源DNA随机插入的方法,成功获得具有绿色荧光信号和潮霉素B筛选标记的转化子,转化效率（以单位质量的DNA的转化子数计）为1 400/mg。选取转化子FOG1菌株经过6代继代培养后,菌落形态、产孢量和绿色荧光蛋白的表达与菌株0083无明显差异。因此,利用聚乙二醇（PEG）为媒介的遗传转化体系是稳定高效的遗传转化体系。

分类号： S435.675

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