沙地葡萄茎痘相关病毒的RT-LAMP检测方法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 范旭东

作者： 范旭东;董雅凤;张尊平;任芳;胡国君;朱红娟

作者机构：

关键词： 沙地葡萄茎痘相关病毒;逆反转录环介导恒温扩增技术;快速检测;反转录聚合酶链式反应

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2013 年 43 卷 003 期

页码： 286-293

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究建立了一种用于沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)的RT-LAMP检测方法.以GRSPaV的RdRp基因序列(GenBank登录号:GQ478314)为靶序列,设计3组RT-LAMP引物,从中筛选出1组有效引物,并确定了适宜的反应温度和反应时间.对RT-LAMP产物进行HhaⅠ酶切,酶切片段与理论片段大小一致,证明了RT-LAMP产物的特异性.RT-LAMP方法能够检测出GRSPaV的RNA最大稀释倍数为10-4,与RT-PCR方法相比更为灵敏.田间葡萄样品RT-LAMP检测结果与已知样品带毒情况相同,表明RT-LAMP检测GRSPaV具有较好的可靠性.在RT-LAMP反应产物中加入染料SYBR GreenⅠ(*1000)可直接观察反应结果.建立的GRSPaV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏、可视化等特点,尤其适合基层使用,具有良好的应用前景.

分类号： S432.41

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