橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李哲

作者： 李哲;贺永国;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;李运合;马晓晓

作者机构：

关键词： 橡胶树;HbHMGR1基因;乳管特异性启动子PHEV2.1;易碎愈伤组织;遗传转化

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2016 年 47 卷 05 期

页码： 597-603

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(Hb HMGR1)乳管表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究Hb HMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础。【方法】用根癌农杆菌EHA105介导表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测。【结果】经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4~6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uid A、NPTII和PHEV2.1-Hb HMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592 bp。2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列。【结论】将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTII-PHEV2.1-Hb HMGR1-35S-uid A的转基因愈伤组织系。

分类号： S794.1

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