兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 原冬伟

作者： 原冬伟;刘家森;郭东春;司昌德;姜骞;林欢;穆亚芳;刘行波;曲连东

作者机构：

关键词： 核酸疫苗;真核表达;VP60;ELISA;T淋巴细胞;PCR检测

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2011 年 31 卷 11 期

页码： 1582-1586

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用pMD18-T-VP60质粒(包含RHDV-TP株VP60基因)PCR扩增并酶切回收VP60基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-VP60,对重组质粒进行酶切和PCR鉴定;将重组质粒转染RK13细胞,进行间接免疫荧光和Western-blot检测;将构建好的重组质粒作为核酸疫苗,腿部肌肉注射免疫小鼠,采用间接ELISA法检测抗体水平;采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术(FACS)检测细胞免疫情况;采用PCR方法检测重组质粒在小鼠体内的生物安全性。结果显示,成功构建pcDNA-VP60真核表达质粒,并在RK13细胞中获得表达。重组质粒作为核酸疫苗能够诱导小鼠体内产生特异性抗体而且抗体水平随免疫次数增加而逐渐增高,在免疫后49d时达到峰值;脾淋巴细胞刺激指数和CD4+、CD8+淋巴细胞亚群数量百分率明显增高,且与对照组存在明显差异。经PCR鉴定VP60基因未整合到小鼠主要脏器染色体上。结果表明,构建的pcDNA-VP60真核表达质粒能够诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,重组质粒对小鼠是安全的。

分类号： S852.65

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