鸡原始生殖细胞转染条件优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邹娴

作者： 邹娴;何燕华;何静怡;王艳;舒鼎铭;罗成龙

作者机构：

关键词： 鸡;原始生殖细胞;稳定转染;脂质体

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 280-288

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得鸡原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）的最佳转染效率,本研究比较不同质粒用量和不同细胞数在3种转染试剂（Lipofectamine 2000、3000和LTX&Plus Reagent）中PGCs的转染效率,利用荧光激活细胞分选技术（fluorescence activated cell sorting technology,FACS）辅助优化Lipofectamine 3000转染试剂,经FACS进一步分选获得带绿色荧光蛋白（GFP）的PGCs,继续培养3周后,移植回注到受体鸡胚中,移植3.5 d后分离性腺拍照观察。结果显示,转染试剂Lipofectamine 3000的转染效率最高,质粒、Lipofectamine 3000转染试剂和PGCs细胞数的配比为3μg:4μL:0.5×104个,转染5h转染效率最高,达到23.4%,与现有的研究结果相比提高了2倍以上。移植回注PGCs到受体鸡胚中,荧光显微镜观察到鸡胚性腺中有GFP阳性细胞。本研究综合考虑转染试剂、质粒用量和细胞数量的影响因素以优化PGCs的转染条件,为高效制备转基因鸡及基因编辑鸡的研究奠定基础。

分类号： S831

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