pAPN基因敲除的IPEC-J2介导的TGEV感染特征分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 夏振涛

作者： 夏振涛;王楠;王婉洁;周期律;黄雷;牟玉莲

作者机构：

关键词： 猪氨基肽酶N;IPEC-J2;TGEV;NF-κB

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 3395-3407

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在探究猪氨基肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）基因敲除的猪空肠上皮细胞系（intestinal porcine epithelial cell line J2,IPEC-J2）介导猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus, TGEV）感染的特征，为深入了解pAPN基因在TGEV感染过程中的作用机制提供理论依据。研究分为pAPN基因敲除IPEC-J2组（IPEC-J2-KO组）、野生型IPEC-J2组（IPEC-J2-WT组）和未接种TGEV的野生型IPEC-J2组（Mock组）3组，每组设置3个重复。首先通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）确定IPEC-J2接种TGEV毒株后收取细胞样品的最佳时间节点；其次，对IPEC-J2-KO进行了脱靶效应检测；然后，通过qPCR、蛋白免疫印迹（western blot, WB）、间接免疫荧光分析（indirect immunofluorescence assay, IFA）和50%组织细胞感染量(50%tissue culture infective dose, TCID50)对接种TGEV的IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT及Mock进行感染特征分析；最后，通过WB检测IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT和Mock中NF-κB p65及其磷酸化蛋白pp65的表达情况。qPCR结果显示，接毒24 h是收集细胞样本以评估TGEV对IPEC-J2影响的最佳时间节点；脱靶分析结果显示，在IPEC-J2-KO中未检测到脱靶效应；病毒感染特征分析结果显示，与IPEC-J2-WT相比，IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均极显著降低（P<0.001）,与Mock相比，IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均无显著差异（P>0.05）,且IPEC-J2-KO内未检测到TGEV-N蛋白的表达；此外，与Mock相比，接种TGEV后，IPEC-J2-WT组NF-κB p65的磷酸化水平极显著上调（P<0.001）,而IPEC-J2-KO组无显著差异（P>0.05）。本研究表明，IPEC-J2-KO可有效抵抗TGEV的感染，接种TGEV未影响IPEC-J2-KO中先天免疫相关信号通路中转录因子NF-κB的活性。该研究为IPEC-J2作为TGEV感染特征研究的细胞模型提供了理论依据，为阐明pAPN基因在TGEV入侵宿主细胞的机制及抗病猪新品种的研究奠定了基础。

分类号： S858.28

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