磁珠筛选抗Cry2Aa人源化单链抗体及检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 武爱华

作者： 武爱华;王耘;刘媛;胡晓丹;刘贤金

作者机构：

关键词： Cry2Aa毒素;单链抗体;磁珠;间接竞争ELISA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 945-950

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围。筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆。D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016~2.881μg/ml。该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性。

分类号： Q78

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