禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异 siRNA的筛选及干扰活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 全炎铭

作者： 全炎铭;崔红玉;赵妍;赵晓岩;石星明;高宏博;闫帅;张晓艳;王玫;王云峰

作者机构： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;东北农业大学动物科技学院

关键词： 鸡马立克氏病病毒;gI和gE基因;禽源U6启动子;siRNA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2011 年 33 卷 5 期

页码： 335-339

收录情况： CSCD

摘要： 为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA，本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板，扩增禽源cU6-3启动子序列，并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列。通过重叠 PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒，将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞，并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率。结果表明，gI和gE基因的抑制效率为10%～80%。分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入 pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936，通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性。结果显示，pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖，并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍。本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA，筛选出能够抑制MDV复制的靶位点，为 MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础。

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[1]禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定. 全炎铭,崔红玉,赵妍,赵晓岩,石星明,高宏博,闫帅,张晓艳,王玫,王云峰. 2011

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