转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 常丽娟

作者： 常丽娟;梁晋刚;宋君;刘文娟;付成平;代晓航;王东;魏超;熊梅

作者机构：

关键词： 转基因玉米;ND207;旁侧序列;转化事件特异性;定性PCR

期刊名称： 作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2023 年 007 期

页码： 1818-1828

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。

分类号： S513

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