TaqMan荧光定量PCR检测滑液囊支原体方法的建立及其感染鸡血液内载量测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱悦

作者： 朱悦;祁晶晶;武梦思;张广冻;丁思羽;陈玥彤;高崧;于圣青

作者机构：

关键词： 滑液囊支原体;TaqMan荧光定量PCR;攻毒模型;增殖变化

期刊名称： 微生物学通报

ISSN：

年卷期： 2024 年 009 期

页码： 3648-3657

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [背景]滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类的常见病原,严重危害家禽养殖业的发展.MS易与其他病原混合感染,给临床诊断造成困难,因此亟须建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对疑似患病禽进行快速诊断,以降低经济损失.[目的]建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,测定MS在感染鸡血液内的载量变化,为临床检测MS感染提供技术支持.[方法]参考GenBank中登录的MS基因保守区域序列设计特异性引物和探针,以温度梯度qPCR法确定最适退火温度,用矩阵法优化其引物和探针加入量,通过提取MS 0801基因组作为模板构建标准曲线,并进行特异性、灵敏度、重复性试验,建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法.使用建立的方法检测滴鼻攻毒和足垫攻毒后MS在感染鸡血液内的载量变化.[结果]建立的TaqMan荧光定量PCR方法最佳退火温度为55℃,引物和探针(10 mol/L)加入量分别为0.8 mL和0.4 mL;扩增曲线具有良好的线性关系,R2>0.99;特异性强,仅对MS有特异性反应,对其他病原均无扩增反应;敏感性高,最低检测限为25 copies/μL;重复性好,批间试验和批内试验变异系数均小于2%.通过TaqMan荧光定量PCR检测MS在感染鸡血液内的动态变化,发现两个攻毒组MS含量的峰值和总体波动无明显差异,但足垫攻毒的MS在血液中的增殖要快于滴鼻攻毒.[结论]本实验建立了一种能够快速检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,并用于检测MS在感染鸡血液内的动态变化,为临床上检测MS感染提供了技术支撑,为疫苗免疫评价方法提供了新的思路.

分类号： R28

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