犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李少晗

作者： 李少晗;陈鑫;张广智;刘维全;秦彤

作者机构：

关键词： 多重PCR;犬细小病毒;犬瘟热病毒;犬冠状病毒Ⅰ型;犬冠状病毒Ⅱ型

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2022 年 012 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒（CPV）、犬瘟热病毒（CDV）、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒（CCoV）的多重PCR方法，根据GenBank相关病毒基因序列，选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域，设计引物分别用于扩增长度为573 bp （CPV）、410 bp （CDV）、289 bp （CCoV-Ⅰ）、105 bp （CCoV-Ⅱ）的4条特异性目的片段。经反应条件优化，利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验。结果表明，在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒，而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒（CPIV）及犬腺病毒（CAV）均未检测到，CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×10~7 copies/μL、1×10~3 copies/μL、1×10~6 copies/μL和1×10~4 copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小；3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增，结果重复稳定性良好；使用该方法对50份临床病例进行检测，CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32%（16/50）、24%（12/50）、18%（9/50）、10%（5/50）,发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例。证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点，并能够实际应用于临床样品检测中，为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助。

分类号： S852.65

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