乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雪寒

作者： 张雪寒;何孔旺;俞正玉;郭容利;倪艳秀

作者机构：

关键词： 乙型脑炎病毒;Bac-to-Bac表达;ELISA方法

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2007 年 23 卷 09 期

页码： 873-877

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的克隆表达日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)的E基因,研究其抗原性,并初步作为诊断抗原建立JEV抗体检测方法。方法用RT-PCR方法扩增E基因全长,然后克隆到pFastbacTM载体中,转化宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒转导到DH10Bac,利用通用引物鉴定阳性,提取其基因组转染昆虫细胞sf9,而后经IFA和Western blot进行鉴定。挑蚀斑纯化获得高纯度和高滴度的重组病毒,收集细胞裂解上清作为抗原建立间接ELISA方法,对不同年龄段猪血清进行检测。结果从JEV中成功克隆E基因,并在昆虫细胞中得到表达,分子量约53kD,具有良好的抗原性。建立的ELISA方法的抗原最佳包被浓度为30μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1:40,阳性判定标准初步定为OD450≥0.3,且OD值待检血清/OD值阴性血清≥2。结论JEV的E基因经过体外昆虫细胞表达,获得抗原性良好的蛋白作为诊断抗原,用其建立的ELISA方法能很好用于猪群JEV抗体水平的检测。

分类号： R446.6

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