猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曾苗苗

作者： 曾苗苗;刘大凯;张记宇;张燎原;冯廷帅;杨小曼;时洪艳;张鑫;陈建飞;石达;冯力

作者机构：

关键词： 猪急性腹泻综合征冠状病毒;自噬;病毒复制;LC3-Ⅱ

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 001 期

页码： 61-69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响，本研究将SADS-CoV （MOI 0.1）接种Vero E6细胞培养36 h后，经透射电子显微镜观察可见，SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构，证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞，24 h后以SADS-CoV感染，24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见，与阴性对照组细胞相比，感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV（MOI 0.1）感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化，结果显示，与阴性对照组相比，SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高，LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势，而p62蛋白表达水平则显著降低（P＜0.05），表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响，本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染，于感染后不同时间收获细胞，通过western blot和病毒滴度(TCID50)测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示，与仅感染病毒的对照组相比，采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID50均显著降低（P＜0.05），而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID50则均显著升高（P＜0.05）。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA （siATG5-1/2/3），将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染，24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示，与未转染siATG5的3组阴性细胞相比，转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低（P＜0.05）。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制，该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

分类号： S852.65

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