基于结核分枝杆菌牛变种C68001随机突变体库筛选和鉴定成膜相关基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 时文健

作者： 时文健;徐磊;张泽;杨蕊;辛凌翔;王楠;陈祥;鑫婷

作者机构：

关键词： 结核分枝杆菌牛变种;Himar 1转座子;随机插入突变库;生物膜;Rv3671c

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 008 期

页码： 3992-4006

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库，高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库，用苏通培养基进行培养，筛选生物膜表型差异明显的突变株，通过抗性标记挽救法及测序，确定突变基因位置；检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响；进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株，利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响，通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能，检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库，筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株，鉴定其中4个为单基因突变菌株，突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv3136和Rv3671c;构建Rv3671c基因敲除、回补和过表达菌株，通过PCR及Western blot验证构建成功，测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能，发现Rv3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定，为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。

分类号： S852.61

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